“O Simple Western nos permite executar ensaios em três horas, os quais normalmente levariam dois dias com os Western Blots tradicionais.”
-Laura Martins, Ph.D., Cientista de Desenvolvimento Inicial, Oxford Biomédica
Desenvolva novos produtos para a terapia gênica
A Oxford Biomédica é uma empresa líder em terapia celular e gênica, totalmente integrada, com uma plataforma avançada de vetores lentivirais e recentemente adicionou recursos de vetores de vírus adenoassociados (AAV). No Grupo de Desenvolvimento Inicial, a Dra. Laura Martins e seus colegas concentram-se no design e desenvolvimento de produtos de terapia gênica, parte do pipeline interno da Oxford Biomédica. A Dra. Martins tem se envolvido particularmente no avanço de produtos vetoriais lentivirais para o tratamento de indicações hepáticas não reveladas.
Aumentando o throughput e economizando tempo
Testar novos produtos vetoriais geralmente envolve a análise da expressão de proteínas codificadas por vetores ou relacionadas a vetores. Nas fases iniciais de um novo projeto interno, a Dra. Martins conseguiu estabelecer rapidamente novos ensaios, graças ao rápido tempo de resposta dos ensaios automatizados baseados em capilares, realizados com o Jess. “O Jess me permitiu testar rapidamente os níveis de expressão de oito proteínas comparadas em quatro linhas celulares diferentes”, explicou a Dra. Martins. Com o Jess, os cientistas de desenvolvimento inicial reduziram significativamente o tempo hands-on em comparação com os Western Blots tradicionais, e ao mesmo, tempo aumentaram o número de amostras que poderiam ser testadas em paralelo.
Quantificação simplificada
Ao usar os sistemas Simple Western, uma pequena quantidade de amostra pode render muito. Um dos desafios enfrentados pelos cientistas do grupo de desenvolvimento inicial foi quantificar os baixos níveis endógenos de uma proteína de membrana alvo numa linha celular específica, algo que se revelou difícil de fazer pelas abordagens tradicionais. Com o Jess, eles conseguiram detectar a proteína alvo usando apenas 0,5 μg de amostra de proteína. Além disso, a Dra. Martins destaca que “a quantificação com o software Compass é o mais simples e rápido possível”.
O RePlex muda o ‘jogo’ totalmente
O recurso RePlex no Jess permitiu que a Dra. Martins e seus colegas maximizassem os dados obtidos em cada execução. Com o RePlex, eles conseguiram testar múltiplos alvos ou quantificar a proteína total para normalização da amostra. A quantificação e normalização total da proteína foi particularmente útil quando o controle de carga de limpeza preferido tinha um peso molecular próximo da proteína alvo. A quantificação total da proteína teve a mesma tendência dos níveis de GAPDH nas amostras testadas (FIGURA 1) e, portanto, pode ser usada como um método fácil de normalização. No geral, o Jess expandiu as capacidades da Oxford Biomédica para desenvolver futuros produtos de terapia celular e gênica, permitindo que os seus cientistas dediquem mais tempo na análise de dados e menos em lavagens manuais e etapas de incubação.
FIGURA 1. Comparação entre GAPDH e quantificação de proteínas totais, que pode ser utilizada para normalizar a expressão de proteínas recombinantes produzidas utilizando vetores de expressão de proteínas lentivirais.
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Fonte:
Site Bio-Techne
